Методы изучения митохондрий растений, Полярография и электрофорез, Побежимова Т.П., Колесниченко А.В., Грабельных О.И., 2004

Методы изучения митохондрий растений, Полярография и электрофорез, Побежимова Т.П., Колесниченко А.В., Грабельных О.И., 2004.
 
  Быстрое развитие теоретических работ в области физиологии и биохимии растений и разработка новых экспериментальных методов исследования органелл растительной клетки требуют постоянного совершенствования методической подготовки исследователей-биологов. Изучение биоэнергетики растений на современном уровне связано с применением сложных методов выделения и анализа митохондрий растений. В то же время выделение функционально активных митохондрий растений имеет ряд особенностей и связано с преодолением определенных методических трудностей. В связи с этим возникла необходимость сведения в одном издании рекомендаций, основанных на нашем опыте многолетней работы по изучению растительных митохондрий.
Книга предназначена для студентов - биологов, аспирантов, преподавателей, ведущих подготовку специалистов по физиологии и биохимии растений и молекулярной биологии, а также научных сотрудников, проводящих экспериментальные работы в области физиологии и биохимии растений.




ВЫДЕЛЕНИЕ МИТОХОНДРИЙ.
Получение функционально активных митохондрий из растений связано с рядом определенных трудностей. В первую очередь, к ним относится наличие плотных и жестких клеточных оболочек, вызывающих механические повреждения при растирании клеток. Отрицательную роль играют кислая реакция клеточного сока, выделяющегося в процессе гомогенизации ткани, а также содержащиеся в значительном количестве во многих растительных клетках фенольные соединения, являющиеся разобщающими агентами и ингибиторами. Другие особенности растительных тканей, например высокое содержание крахмала, хлорофилла, масел и т.д., также оказывают влияние на качество и чистоту изолированной митохондриальной фракции. Поэтому для получения интактных митохондрий в каждом конкретном случае в зависимости от объекта и его физиологического состояния необходимо подбирать оптимальные условия выделения органелл.

Процедура выделения митохондрий включает четыре этапа: 1) гомогенизация; 2) отделение митохондриальной фракции методом дифференциального центрифугирования; 3) очистка полученной фракции путем повторного промывания; 4) определение чистоты и качества полученного препарата митохондрий. Все операции по выделению митохондрий должны проводиться в строго контролируемых условиях, при температуре 0-4°С, для чего необходимо иметь криостат (Рис. 4) и рефрижераторные центрифуги. Во время всей процедуры выделения органелл как растворы, так и посуда должны находиться в воде со льдом.

СОДЕРЖАНИЕ.
1. ВЫДЕЛЕНИЕ МИТОХОНДРИЙ И АНАЛИЗ ИХ ЭНЕРГЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ.
1.1 ВЫДЕЛЕНИЕ МИТОХОНДРИЙ.
1.2 МЕТОД ПОЛЯРОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ЭНЕРГЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МИТОХОНДРИЙ.
2. ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ БЕЛКОВ.
2.1 ВЫДЕЛЕНИЕ СУММАРНОГО БЕЛКА.
2.2 ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ С ДОДЕЦИЛСУЛЬФАТОМ НАТРИЯ (ПААГ С ДДС-NA) (ДЕНАТУРИРУЮЩИЙ ЭЛЕКТРОФОРЕЗ).
2.3 ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПААГ НАТИВНОГО БЕЛКА В ГРАДИЕНТЕ ПОРИСТОСТИ ГЕЛЯ.
2.4 ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В ПААГ НАТИВНОГО БЕЛКА СО СДВИГОМ ЗАРЯДА.
2.5 БЛОТТИНГ.
2.6 ХОД ПРОВЕДЕНИЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА.
3. ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ.
3.1 ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ В АГАРОЗЕ.
3.2 ПЕРЕКРЕСТНЫЙ ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ.
3.3 РОКЕТ-ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ.
4. РАБОТА С ПРИБОРАМИ.
5. СПРАВОЧНЫЕ ДАННЫЕ.



Бесплатно скачать электронную книгу в удобном формате, смотреть и читать:
Скачать книгу Методы изучения митохондрий растений, Полярография и электрофорез, Побежимова Т.П., Колесниченко А.В., Грабельных О.И., 2004 - fileskachat.com, быстрое и бесплатное скачивание.

Скачать pdf
Ниже можно купить эту книгу по лучшей цене со скидкой с доставкой по всей России.Купить эту книгу


Скачать - pdf - Яндекс.Диск.




Теги: учебник по биологии :: биология :: Побежимова :: Колесниченко :: Грабельных